Серологический метод диагностики предусматривает применение 2 направлений исследований: серодиагностики (выявление специфических антител в сыворотке крови обследуемых) и сероидентификация (определение антигенных свойств выделенного возбудителя с целью установления его вида и типа).
При серодиагностике применяются реакции агглютинации, преципитации, лизиса, РСК, реакции с использованием меченых антигенов или антител. Компонентами этих реакций являются: сыворотки крови обследуемых больных и стандартные антигенные препараты. Целью исследований являются определение титров антител к возбудителям инфекционных заболеваний в исследуемых сыворотках.
Выявление высоких титров специфических антител особенно если они достигают уровня так называемых «диагностических» титров, подтверждает предполагаемый диагноз. Большое значение придается исследование парных сывороток, когда одновременно титруются сыворотки взятые в самом начале заболевания (3-4ый день) и сыворотки, полученные на 7-й - 10-й день заболевания. Диагностическое значение имеет 4-кратное нарастание титров антител.
При сероидентификации чаще других используется реакция агглютинации на стекле. Компоненты реакции: выращенная чистая культура возбудителя заболевания (антиген) и стандартные диагностические иммунные кроличьи сыворотки (антитела).
Достоинство серологического метода - простота, доступность, высокая чувствительность, специфичность, экспрессность.
Недостатки: необходимость дорогостоящих стандартных препаратов и аппаратуры.
Аллергологический метод
Данный метод предусматривает выявление сенсибилизации организма к тому или иному инфекционному агенту, что имеет большое диагностическое значение. Известно, что течение некоторых инфекционных заболеваний сопровождается формированием гиперчувствительности замедленного типа. В связи с этим внутрикожное введение таким больным малых доз аллергена вызывает соответствующую реакцию со стороны организма, вызванную повторной встречей с аллергеном. Реакция протекает по замедленному типу, и на месте введения аллергена через 48-72 часа появляется покраснение, припухлость, иногда - инфильтрат (положительная реакция). Если организм не сенсибилизирован, внутрикожное введение не вызовет никакой реакции со стороны организма (отрицательная реакция). Промышленностью выпускаются специальные препараты для проведения кожно-аллергических проб: туберкулин, дизентерин, бруцеллин, тулярин и др.
Аллергологический метод имеет особенно большое значение в тех случаях, когда выявление возбудителя инфекционного заболевания затруднено или же невозможно (например, при лепре) или когда для этого требуется много времени (например, при бруцеллезе). Проба с туберкулином используется на практике не только с диагностической целью, но и для определения сроков ревакцинации детей вакциной БЦЖ, а также для изучения коллективного противотуберкулезного иммунитета.
Достоинства аллергологического метода - его простота, достоверность, экспрессность.
Недостаток - ограниченность применения, так как далеко не при всех инфекционных заболеваниях формируется гиперчувствительность замедленного типа.
СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ В ДИАГНОСТИКЕ
ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ
В настоящее время иммунологические методы исследования широко применяются для лабораторной диагностики инфекционных и неинфекционных заболеваний.
Реакции взаимодействия между антигенами и антителами называются серологическими (serum – сыворотка, logos – учение).
Суть всех серологических реакций состоит в специфическом соединении антигенов и соответствующих им антител с образованием комплекса. Серологическая реакция возможна, если имеется иммунологическое соответствие (гомологичность) – главных компонентов – антигенов и антител. В основе иммунологической специфичности лежит структурная комплементарность антигена и антитела.
Процесс взаимодействия антигенов и антител протекает в две фазы – специфическую и неспецифическую. Первая фаза развивается быстро. Она состоит из специфического соединения активного центра антитела с детерминантными группами соответствующего (гомологичного) антигена. Более медленно развивается последующая фаза, неспецифическая – это внешнее проявление реакции антиген-антитело (выпадение хлопьев, помутнение среды и т. д.)
Серологические реакции применяются с двумя целями:
1) для выявления антител в исследуемой сыворотке с помощью известных антигенов (серодиагностика);
2) для установления неизвестного антигена с помощью известных сывороток (сероидентификация).
Определение неизвестного антигена при микробиологических исследованиях проводится с целью установления родовой, видовой, типовой принадлежности возбудителей, выделенных у обследуемого. В таких случаях из двух основных компонентов реакции (антитело, антиген) неизвестным является антиген, реакция должна проводиться с заведомо известными антителами. При этом антигеном является чистая культура выделенных из исследуемого материала микроорганизмов. В качестве заведомо известных антител применяются иммунные диагностические сыворотки. Последние получают из крови животных (чаще всего кроликов), предварительно иммунизированных соответствующими бактериальными антигенами. Иммунные сыворотки должны содержать высокий уровень специфических антител.
Помимо этого, серологические реакции могут использоваться для определения различных небактериальных антигенов: для установления групп крови, тканевых антигенов, опухолей, для подбора пар донор – реципиент при трансплантации органов и тканей и т. д.
Серологические реакции могут применяться и для обнаружения антител в сыворотке крови. В таких случаях требуется заведомо известный антиген (диагностикум). В качестве антигенов могут быть использованы взвеси живых или убитых микробов, экстракты или изолированные химические фракции из них.
Многочисленные серологические реакции, применяемые в настоящее время в практике здравоохранения, различаются по феномену, выявляющему связь антигена и антитела. Видимое проявление реакции будет различным в зависимости от того, какая методика используется, в каком физическом состоянии применяется антиген или иммунная сыворотка, участвует ли в реакции комплемент. Например, если используется корпускулярный антиген, имеет место феномен агглютинации – склеивание частиц (реакция агглютинации). Поскольку корпускулярные антигены состоят из частиц относительно крупного размера, выпадает видимый хлопьевидный осадок. Если же в реакции применяется растворимый антиген, наблюдается выпадение мелко зернистого осадка – преципитата (реакция преципитации). В случае, если в реакцию взаимодействия бактериальных антигенов и иммунной сыворотки вводится и комплемент, происходит бактериолиз (растворении бактериальных антигенов) или лизис эритроцитов (когда они используются в качестве антигена). Применение в серологических реакциях иммунных сывороток, меченых флюорохромами, ферментами или радиоизотопами, позволяет установить специфическое связывание антигенов с антителами по соответствующему феномену (свечение, изменение цвета или активности радиоизотопной метки).
Для оценки серологических реакций применяются такие критерии, как специфичность и чувствительность. Специфичность – это способность антигенов реагировать только с гомологичными антителами. Чувствительность – способность к специфическому взаимодействию при минимальных количествах антигенов и антител.
Реакция агглютинации
Реакция агглютинации (РА) – специфическое взаимодействие антигенов с антителами, выражающееся в склеивании антигенов под воздействием антител сыворотки и выпадении их в осадок в присутствии электролита. Была первой из предложенных серологических реакций.
Особенность реакции агглютинации состоит в том, что в качестве антигенов при её постановке используются клетки или другие корпускулярные частицы. Реакция основана на способности корпускулярных антигенов специфически соединяться, с гомологичными антителами иммунных сывороток с образованием осадка в виде зерен, хлопьев, комочков. Реакция проходит только в присутствии электролитов. Антигены, применяемые в реакции, называются агглютиногенами, антитела – агглютининами, а образующийся осадок – агглютинатом.
В качестве антигена в реакции агглютинации можно применять взвесь живых культур в изотоническом растворе хлорида натрия или микробы, убитые формалином, спиртом или прогреванием, а также эритроциты, лейкоциты или другие клетки.
Источником антител служит известная агглютинирующая сыворотка, полученная путем иммунизации животных соответствующими антигенами, или сыворотка обследуемого больного.
Существуют разные способы постановки реакции агглютинации. Из них наиболее часто применяются: ориентировочная реакция на стекле, развернутая агглютинация в пробирках, реакции гемагглютинации и непрямой гемагглютинации (РНГА).
Похожая информация.
Оглавление темы "Методы обнаружения вирусов. Методы диагностики микозов (грибковых заболеваний). Методы обнаружения простейших.":
Выявление противовирусных антител (AT) в сыворотке крови. РТГА. РСК. РИФ. Иммуносорбционные методы выявления противовирусных антител.
Более простой и доступный подход - выявление противовирусных антител (AT) в сыворотке . Образцы крови необходимо отбирать дважды: немедленно после появления клинических признаков и через 2~3 нед. Чрезвычайно важно исследовать именно два образца сыворотки. Результаты однократного исследования нельзя считать окончательными из-за невозможности связать появление AT с настоящим случаем. Вполне возможно, что эти AT циркулируют после предшествующей инфекции. В подобной ситуации роль исследования сыворотки, полученной в период рекон-валесценции, трудно переоценить. На наличие заболевания в период отбора первой пробы указывает не менее чем четырёхкратное увеличение титра AT, выявленное при исследовании второй пробы.
Перечисленные ниже методы не позволяют дифференцировать антитела (AT), образующиеся во время болезни и циркулирующие после выздоровления (продолжительность этого периода вариабельна для различных инфекций). Поскольку для адекватной диагностики необходимо подтвердить достоверное увеличение титров AT в двух пробах, то первую пробу исследуют в острой фазе, а вторую - в период выздоровления (через 2-3 нед). Полученные результаты носят ретроспективный характер и более пригодны для проведения эпидемиологических обследований.
РТГА выявляет AT, синтезируемые против гемагглютининов вирусов (например, вируса гриппа). Метод позволяет легко выявлять подобные антитела (AT) в сыворотке больного.
РСК - основной метод серодиагностики вирусных инфекций (среди доступных). Реакция выявляет комплементсвязывающие IgM и IgG, но не дифференцирует их; для оптимизации получаемых результатов постановка реакции требует определённых навыков персонала.
РИФ . При возможности получить биоптат инфицированной ткани и доступности коммерческих наборов AT, меченных флюоресцеином, диагноз может подтвердить реакция прямой иммунофлюоресценции. Постановка реакции включает инкубацию исследуемой ткани с AT, их последующее удаление и люминесцентную микроскопию образца.
Иммуносорбционные методы выявления противовирусных антител
Иммуносорбционные методы (например, ИФА и РИА) более информативны, поскольку выявляют IgM и IgG по отдельности, что позволяет делать определённые выводы о динамике инфекционного процесса или состоянии реконвалесценции. Для выявления AT известный Аг сорбируют на твёрдом субстрате (например, на стенках пробирок, пластиковых микропланшетах, чашках Петри) и вносят различные разведения сыворотки пациента. После соответствующей инкубации несвязавшиеся AT удаляют, вносят антисыворотку к Ig человека, меченную ферментом, повторяют процедуру инкубирования и отмывания несвязанных AT и вносят какой-либо хромогенный субстрат (чувствительный к действию фермента). Поскольку изменение окраски пропорционально содержанию специфических AT, то вполне возможно определение их титра спектрофотометрическим способом. В диагностике ВИЧ-инфекции наи- большее распространение нашёл метод иммуноблотннга.
Реакция связывания комплемента (РСК) ставится в две фазы: в первой фазе антиген соединяют с исследуемой сывороткой, в которой предполагают наличие антител и добавляют комплемент, инкубируют в термостате 30 минут.
Вторая фаза: добавляют гемолитическую систему (эритроциты барана +гемолитическая сыворотка). После инкубации в термостате в течение 30 минут учитывают результат.
При положительной РСК антитела сыворотки, соединившись с антигеном, образуют иммунный комплекс, который присоединяет к себе комплемент, и гемолиза не произойдет. Если реакция отрицательная (антител в исследуемой сыворотки нет) - комплемент останется свободным и произойдет гемолиз.
РСК применяется для серологической диагностики сифилиса, гонорее, сыпного тифа и других заболеваний.
Реакции иммунитета с использованием меченых антигенов и антител основаны на том, что один из ингредиентов, участвующих в реакции (антигены или антитела) соединяют с какой-либо меткой, которую легко можно обнаружить. В качестве метки используют флюорохромы (РИФ), ферменты (ИФА), радиоизотопы (РИА), электроноплотные соединения (ИЭМ).
Иммуноферментный анализ (ИФА), как и другие реакции иммунитета, используется: 1) для определения неизвестного антигена с помощью известных антител или 2) для выявления антител в сыворотке крови с помощью известного антигена. Особенность реакции в том, что известный ингредиент реакции соединён с ферментом (например, пероксидазой). Присутствие фермента определяют с помощью субстрата, который при действии фермента окрашивается. Наиболее широко применяется твёрдофазный ИФА.
1) Обнаружение антигена. Первый этап - адсорбция специфических антител на твёрдой фазе, в качестве которой используют полистироловые или поливинилхлоридные поверхности лунок пластиковых панелей. Второй этап - добавление исследуемого материала, в котором предполагается наличие антигена. Антиген связывается с антителами. После этого лунки промывают. Третий этап - добавление специфической сыворотки, содержащей антитела против данного антигена, меченые ферментом. Меченые антитела присоединяются к антигенам, а их избыток удаляется промыванием. Таким образом, если в исследуемом материале имеются антигены, на поверхности твёрдой фазы образуется комплекс антитела - антиген - антитела, меченые ферментом. Для обнаружения фермента добавляют субстрат. Для пероксидазы субстратом служит ортофенилендиамин в смеси с Н 2 О 2 в буферном растворе. Под действием фермента образуются продукты, имеющие коричневую окраску.
2) Обнаружение антител. Первый этап - адсорбция специфических антигенов на стенках лунок. Обычно в коммерческих тест-системах антигены уже адсорбированы на поверхности лунок. Второй этап - добавление исследуемой сыворотки. При наличии антител образуется комплекс антиген-антитело. Третий этап - после отмывания в лунки добавляют антиглобулиновые антитела (антитела против человеческих глобулинов), меченые ферментом. Результаты реакции оценивают, как указано выше.
В качестве контролей используют образцы заведомо положительные и заведомо отрицательные, которые имеются в коммерческих системах.
ИФА применяется для диагностики многих инфекционных заболеваниях, в частности, ВИЧ-инфекции, вирусных гепатитов.
Иммуноблоттинг - это разновидность ИФА (сочетание электрофореза и ИФА). Методом электрофореза в геле разделяют биополимеры, например, антигены вируса иммунодефицита человека. Затем переносят разделённые молекулы на поверхность нитроцеллюлозы в том же порядке, в каком они находились в геле. Процесс переноса называется блоттинг, а полученный отпечаток - блот (англ. blot - пятно). На этот отпечаток действуют исследуемой сывороткой. Затем добавляют сыворотку против глобулинов человека, меченую пероксидазой, затем субстрат, который под действием фермента приобретает коричневый цвет. Образуются коричневые полосы в тех местах, где антитела соединились с антигенами. Метод позволяет обнаружить антитела к отдельным антигенам вируса.
Радиоиммунный анализ (РИА). Метод позволяет определить количество антигена в исследуемой пробе. Сначала к иммунной сыворотке присоединяют материал, предположительно содержащий антиген, затем - известный антиген, меченный радиоизотопом, например I 125 . В результате происходит связывание определяемого (немеченого) и известного меченого антигена с ограниченным количеством антител. Так как меченый антиген добавляется в определённой дозе, то можно определить, какая его часть связалась с антителами, а какая осталась свободной из-за конкуренции с немеченым антигеном и была удалена. Количество меченого антигена, связавшегося с антителами, определяют с помощью счётчика. Оно обратно пропорционально количеству определяемого антигена.
Иммуноэлектронная микроскопия (ИЭМ). К антигену, например, к вирусу гриппа, присоединяется специфическая антисыворотка, меченая электроноплотным веществом. В качестве метки применяют металлосодержащие белки (ферритин, гемоцианин) или коллоидное золото. При микроскопии в электронном микроскопе делают фотографии, на которых видны вирионы гриппа с присоединившимися к ним тёмными точками - молекулами меченых антител.
Контрольные вопросы
Приобретённый иммунитет, отличие его от наследственного (видового, врождённого). Виды приобретённого иммунитета.
Задача. В семье заболел дифтерией ребенок Валерий, трёх лет. Другие члены семьи не заболели, причём мать переболела дифтерией в детстве, а отец был привит дифтерийным анатоксином. Старшая сестра Наташа, пяти лет, в своё время не была привита дифтерийным анатоксином из-за медицинских противопоказаний, поэтому пришлось провести ей экстренную профилактику с помощью противодифтерийной антитоксической сыворотки. Младший брат, Виталий, трёх месяцев, не заболел, хотя ничем не был привит. В доме есть кошка и собака, они не заболели. Назовите для каждого из членов семьи и для животных вид иммунитета, благодаря которому они не заболели.
Что такое антиген? Какие вещества могут быть антигенами? Полноценные антигены и гаптены, чем они отличаются друг от друга? Структура антигена. Как называется часть молекулы антигена, определяющая его специфичность? Назовите известные Вам антигены. Что такое аутоантигены? Антигенное строение микробной клетки. Жгутиковые и соматические антигены; локализация, буквенное обозначение, химическая природа, отношение к температуре, способ получения, практическое применение. Анатоксин, его свойства, применение, получение. Какая ткань составляет иммунную систему организма? Укажите центральные и периферические органы иммунной системы человека. Опишите процесс формирования гуморального и клеточного иммунного ответа. Укажите клетки, которые осуществляют захват и переваривание антигена; клетки, которые взаимодействуют при формировании гуморального иммунитета, клеточного иммунитета; клетки, которые трансформируются и превращаются в плазмоциты, продуцирующие антитела; клетки, стимулирующие этот процесс; клетки, которые угнетают иммунный ответ; клетки, которые убивают опухолевые клетки, и заражённые вирусом клетки. Что такое антитела? Как получить иммунную сыворотку? Как получить сыворотку, которая бы нейтрализовала столбнячный токсин? Против каких антигенов образуются антитоксины, агглютинины, гемолизины? Какие антитела образуются при введении в организм дифтерийного анатоксина? дифтерийных бактерий? Химическая природа и структура антител. Что такое активный центр иммуноглобулина? Перечислите классы иммуноглобулинов, их свойства. Укажите класс иммуноглобулинов, способных проникать через плаценту. К какому классу относятся секреторные иммуноглобулины? Динамика накопления антител. Чем отличается вторичный иммунный ответ от первичного? Как в практической медицине используются знания о динамике иммунного ответа? Что такое реакции иммунитета, каков их механизм, фазы реакции. В каких 2-х направлениях используют реакции иммунитета? Перечислите реакции иммунитета.
Задача. Поставьте вместо пропущенных слов «анатоксин» или «антитоксин»: _________ является антигеном, _________ является антителом, __________ создаёт при введении в организм активный иммунитет, __________ создаёт при введении в организм пассивный иммунитет, __________ получают путём иммунизации животных, ___________ получают из токсина при воздействии формалином и теплом, ___________ нейтрализует токсины, __________ вызывает в организме образование антител.
Реакция агглютинации: что такое агглютинация, что является антигеном, что - антителом; методы постановки, какие контроли ставятся и для чего; как должны выглядеть контроли. Агглютинирующие сыворотки, что они содержат, как их получают, для чего применяются; что такое титр агглютинирующей сыворотки? Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации: что служит антигеном в этой реакции, как его получают, механизм реакции. Что такое эритроцитарный диагностикум? Что такое антительный эритроцитарный диагностикум? Реакции преципитации: что такое преципитация, что служит антигеном; как получить преципитирующую сыворотку? Что такое титр преципитирующей сыворотки? Методы постановки, практическое применение.
Реакция связывания комплемента (РСК): принцип РСК; что образуется при взаимодействии иммунной сыворотки со специфическим антигеном; что происходит с комплементом, если он присутствует при этом взаимодействии? Какова судьба комплемента в том случае, если между антигеном и антителами нет специфического сродства? Если конечным результатом РСК является гемолиз, что это означает - положительный или отрицательный результат? Методика постановки РСК. Почему исследуемую сыворотку надо инактивировать? Гемолитическая сыворотка: что содержит, как ее получают, что такое титр и как его определяют? Комплемент: химическая природа, отношение к высокой температуре, где содержится? Как можно разрушить комплемент? Что практически применяется в качестве комплемента?
Задача. На одежде человека, обвиняемого в убийстве, обнаружено пятно крови. С помощью какой реакции можно определить, человеческая ли это кровь; что в этой реакции будет антигеном, и что антителами; какой диагностический препарат нужно иметь в лаборатории для этой реакции, как его приготовляют?
Задача. Как при помощи реакции преципитации определить, является ли доставленный для анализа образец мяса крупного рогатого скота или мясом лошади; какие необходимы диагностические препараты?
Реакция преципитации в агаровом геле, способы постановки, практическое применение.
Серологические исследование (тесты) — лабораторные методы исследований, основанные на выявлении антител или антигенов в биологическом материале пациента. Чаще всего для анализа используется кровь, реже — моча, слюна, гнойное отделяемое или образцы тканей, взятые в ходе биопсии.
Область применения
- Определение группы крови.
- Выявление специфических опухолевых белков — онкомаркеров (например, при подозрениях на рак яичников, предстательной железы, мочевого пузыря, желудка и др.).
- Диагностика вирусных, бактериальных, грибковых, протозойных инфекций (ВИЧ, сифилиса, токсоплазмоза, хламидиоза, краснухи, герпеса, гельминтозов, клещевого энцефалита и т. д.).
- Определение гормонов, ферментов и лекарственных препаратов, содержащихся в исследуемом биоматериале в минорных концентрациях (менее 10−10 г/л).
Суть метода серологические тесты
Серологические тесты отличаются по технике постановки, однако все они являются результатом взаимодействия антигенов (чужеродных соединений) с соответствующими антителами. Исследование состоит из двух последовательных фаз. Первая фаза характеризуется взаимодействием между антигенами и антителами с образованием иммунных комплексов (положительная реакция). Во второй фазе появляются внешние признаки, подтверждающие наличие этих самых комплексов (в зависимости от типа реакции это могут быть помутнение испытуемого раствора, изменение его цвета, выпадение хлопьев и т. д.). Отсутствие видимых физических явлений расценивается как отрицательный результат теста.
Подготовка к серологическим исследованиям
Зависит от вида исследования. Об особенностях сдачи конкретного анализа должен рассказать медицинский специалист при записи на процедуру.
Сдать необходимый серологический тест вы можете в клинике «Спектра». Мы заказываем проведение анализов в лучших столичных лабораториях, работающих по европейским стандартам, что служит гарантией получения быстрых и достоверных результатов. Наши врачи помогут расшифровать заключение и дадут рекомендации по дальнейшей диагностике.
Реакция Вассермана (RW) — это самая популярная иммунологическая реакция, применяемая для диагностики сифилиса , начиная со времени своего открытия в 1906 году. RW относится к группе реакций связывания комплемента (РСК) и основывается на способности сыворотки крови больного сифилисом образовывать комплекс с соответствующими антигенами. Современные методики РСК, применяемые для диагностики сифилиса, значительно отличаются по своим антигенам от классической реакции Вассермана, однако, термин «реакция Вассермана» за ними традиционно сохраняется.
В крови заразившегося человека появляются антитела, выработанные иммунной системой. В возбудителе заболевания — бледной трепонеме (Treponema pallidum), содержится антиген кардиолипин, который вызывает выработку антител, определяемых с помощью RW. Положительная реакция Вассермана как раз и свидетельствует о присутствии таких антител в крови человека и на этом основании делается вывод о наличии заболевания.
Показателем результата исследования в РСК служит реакция гемолиза. В реакции участвуют два компонента: эритроциты барана и гемолитическая сыворотка. Гемолитическую сыворотку получают путем иммунизации кролика эритроцитами барана. Её инактивируют в течение 30 минут при температуре 56°С. Результаты РСК оценивают в зависимости от наличия или отсутствия гемолиза в опытных пробирках. Наличие гемолиза объясняется тем, что если в испытуемой сыворотке отсутствуют сифилитические антитела, то реакция антиген-антитело не происходит, и весь комплемент идет на реакцию бараньи эритроциты-гемолизин. А если имеются специфические антитела, комплемент полностью уходит на реакцию антиген-антитело и гемолиза не происходит.
Все ингредиенты для реакции Вассермана берутся в одинаковом объеме — 0,5 или 0,25 мл. Для прочной фиксации комплемента на специфическом комплексе, смесь исследуемой сыворотки, антигена и комплемента помещают в термостат при температуре 37° на 45-60 мин. (I фаза реакции), после чего вносят гемолитическую систему, состоящую из бараньих эритроцитов и гемолитической сыворотки (II фаза реакции). Далее пробирки вновь помещают в термостат на 30-60 минут до наступления гемолиза в контроле, в котором антиген заменяют физиологическим раствором, а вместо исследуемой сыворотки вносят физиологический раствор. Антигены для реакции Вассермана выпускают в готовом виде с указанием титра и способа разведения.
Максимальную позитивность реакции Вассермана принято обозначать количеством крестов: ++++ (резко положительная реакция) — свидетельствует о полной задержке гемолиза; +++ (положительная реакция) — соответствует значительной задержке гемолиза, ++ (слабоположительная реакция) — свидетельство частичной задержки гемолиза, + (сомнительная реакция) — соответствует о незначительной вдержке гемолиза. Отрицательная RW характеризуется полным гемолизом во всех пробирках опыта.
Однако, иногда возможны и ложноположительные результаты — это связано с тем, что кардиолипин в некотором количестве содержится и в клетках человеческого организма. Иммунная система человека не создает антител против «собственного» кардиолипина, но из этого правила бывают и исключения, благодаря которым положительная реакция Вассермана возникает у совершенно здорового человека. Особенно часто это наблюдается после перенесенных тяжелых вирусных и прочих заболеваний — пневмонии, малярии, болезней печени и крови, при беременности, т.е. в моменты серьезного ослабления иммунитета.
Если врач подозревает у пациента ложноположительный результат на реакцию Вассермана, то он может назначить ему ряд дополнительных исследований, которые обычно применяются при диагностике заболеваний, передающихся половым путем.
Заболевания и случаи, при которых врач может назначить анализ крови на RW
Проведение процедуры сдачи анализа крови на RW
Кровь на RW сдается только натощак. Крайний прием пищи должен быть не позднее 6 часов до сдачи анализа. Медицинский работник усаживает пациента или укладывает на кушетку и осуществляет забор 8-10 мл крови из локтевой вены.
Если анализ необходимо сделать младенцу, то забор осуществляется из черепной или яремной вены.
Подготовка с сдаче анализа крови на RW
За 1—2 суток до сдачи анализа следует прекратить употребление спиртных напитков. Также не рекомендуется есть жирную пищу — она может исказить результат. В период подготовки к анализу следует воздержаться от приема препаратов наперстянки.
Противопоказания
Результат анализа будет ложным, если:
- человек болен инфекционным заболеванием или только переболел им,
- у женщины период менструации,
- беременная в последние недели перед родами,
- первые 10 дней после родов,
- первые 10 дней жизни младенца.
При первичном сифилисе реакция Вассермана становится положительной на 6-8 неделе течения заболевания (в 90 % случаев), при этом отмечается следующая динамика:
- в первые 15-17 дней после заражения реакция у большинства больных, как правило, отрицательная;
- на 5-6-й неделе заболевания примерно у 1/4 части больных реакция становится положительной;
- на 7-8-й неделе заболевания RW становится положительной у большинства.
При вторичном сифилисе RW положительна всегда. Вместе с другими серологическими реакциями (РПГА, ИФА, РИФ) позволяет не только выявить наличие возбудителя, но и выяснить приблизительный срок заражения.
При развитии сифилитической инфекции на 4-й неделе заболевания, после возникновения первичной сифиломы, реакция Вассермана переходит из отрицательной в положительную, оставаясь таковой и во вторичном свежем, и во вторичном рецидивном периоде сифилиса. В скрытом вторичном периоде и без лечения RW может переходить в отрицательную с тем, чтобы при наступлении клинического рецидива сифилиса вновь стать положительной. Поэтому, в скрытом периоде сифилиса отрицательная реакция Вассермана не свидетельствует о его отсутствии либо излеченности, а лишь служит благоприятным прогностическим симптомом.
При активных поражениях третичного периода сифилиса положительная RW встречается приблизительно в 3/4 случаев заболевания. Когда же активные проявления третичного периода сифилиса исчезают, она часто переходит в отрицательную. В этом случае отрицательная реакция Вассермана у больных не свидетельствует о том, что у них нет сифилитической инфекции.
При раннем врожденном сифилисе RW практически во всех случаях положительна и является ценным методом для верификации болезни. При позднем врожденном сифилисе результаты ее соответствуют таковым, полученным в третичном периоде приобретенного сифилиса.
Большое практическое значение имеет исследование реакции Вассермана в крови у больных сифилисом, подвергающихся лечению. У некоторых больных, несмотря на энергичную противосифилитическую терапию, реакция Вассермана не переходит в отрицательную — это так называемый серорезистентиый сифилис. В данном случае проводить бесконечно противосифилитическую терапию, добиваясь перехода положительной RW в отрицательную, не имеет смысла.
Из изложенного выше следует, что отрицательная реакция Вассермана, не всегда является признаком отсутствия сифилитической инфекции в организме.
Возможна положительная реакция Вассермана у людей при ряде других, не связанных с сифилисом заболеваниях и состояниях:
Всё перечисленное свидетельствует о том, что положительный результат реакции Вассермана, еще не является безусловным доказательством наличия сифилитической инфекции.
Восстановление после сдачи анализа
После сдачи анализа крови врачи рекомендуют правильное и сбалансированное питание, а также как можно больше жидкости. Можно позволить себе теплый чай и шоколад. Будет полезным воздержаться от физических нагрузок и ни в коем случае не принимать алкоголь.
Нормы
В норме в крови должен наблюдаться гемолиз — это считается отрицательной реакцией на сифилис (Реакция Вассермана отрицательная). Если же гемолиз отсутствует, оценивается степень реакции, которая зависит от стадии заболевания (помечается знаками «+»). При этом следует знать, что у 3-5% совершенно здоровых людей реакция может быть ложноположительной. В то же время, в первые 15-17 дней после заражения, реакция у больных людей может быть ложноотрицательной.
